Técnicas da engenharia genética

DNA recombinante:
-A partir de uma enzima de restrição isola-se um gene de interesse;
-O gene é inserido num plasmídeo que funciona como um vetor e que também foi cortado pela mesma enzima de restrição;
-O plasmídeo e o gene de interessa são ligados pelo DNA ligase, formando um DNA recombinante;
-O vetor é transformado em bactérias;
-Aquando da multiplicação da população de bactérias ocorre a replicação do plasmídeo. Ao fim de algumas gerações obtém-se inúmeras cópias do gene de interesse.

Enzimas de restrição - originam-se através de endonucleases e possuem extremidade complementares e coesivas.

Ligase do DNA - enzima que estabelece uma ligação covalente entre nucleótidos adjacentes a dois fragmentos de DNA.

DNA complementar:
- A partir de um mRNA funcional e recorrendo a uma transcriptase reversa é possível sintetizar uma cadeia simples de DNA;
- Esta cadeia de DNA é depois duplicada por ação de uma polimerase, formando-se uma cadeia de DNA nova - cDNA;
- Consegue-se sintetizar proteínas que podem ser usadas em tratamentos.

Eletroforese:
- Fragmentos de diferentes tamanhos de DNA, podem ser separados por eletroforese.
- DNA sujeito a um campo elétrico migra para o pólo positivo num gel de agarose;
- Fragmentos de menor dimensão movem-se mais rapidamente;
- Podem ser visualizados através de corantes que emitem fluorescência quando excitaddos por radiação UV.

PCR - reação de polimerização em cadeia:
- Quebra das ligações de hidrogénio, desnaturação das cadeias de DNA através do aquecimento;
- Temperatura reduzida, assim os iniciadores emparelham-se em cadeias simples;
- Aumento da temperatura, ativa DNA polimerase;
- DNA polimerase sintetiza nova cadeia por complementariedade. Elongação da cadeia de DNA entre os iniciadores.